［緩衝液（Buffer）］

　緩衝液は少量のＨ+あるいはＯＨ-イオンを加えたときに溶液のｐＨが大きく変化することに抵抗するような物質の混合物をいう．普通，緩衝溶液は共役酸と共役塩基で調製する．各種緩衝液におけるその混合比とｐＨの関係は，下記に示すが，それ以外は実験化学講座２４巻ページ204-227（丸善）又は農芸化学実験書２巻670-677を参考にせよ

 

Ⅰ．リン酸緩衝液（Phosphate buffer）

リン酸二水素ナトリウム（二水和物）  （Sodium Dihydrogen Phosphate, NaH2PO4･2H2O, M.W 156.01）とリン酸水素二ナトリウム（１２水和物）（di- sodium Hydorogen Phosphate, Na2HPO4･12H2O, M.W 358.14）で調製する．

 

　　　 NaH2PO4-Na2HPO4

1/15M NaH2PO4(ml) 9 7 4 0.5
1/15M Na2HPO4(ml) 1 3 6 9.5
pH 5.91 6.47 6.98 8.04

例　0.3 M Phosphate buffer (pH 7.0) を３リットル調製する．

　上記の表からNaH2PO4溶液４ｍｌとNa2HPO4溶液６ｍｌを混合するとｐＨ　6.98のbufferができる．

1.各溶液の調製

0.3 M NaH2PO4溶液1200 mlと0.3 M Na2HPO4溶液1800 mlを調製する．

0.3 M NaH2PO4溶液は，

156.01×0.3× 1200／1000  =  56.164 g                              

       56.16 gを溶かし1200 mlにする．

 

0.3 M Na2HPO4溶液は，

      358.14×0.3× 1800／1000　= 193.396 g                             

      193.396 gを溶かし1800 mlにする．

2.pHの調整

 NaH2PO4溶液1000 mlとNa2HPO4溶液1500 mlを混合し，ｐＨを測定する．　　

 次に残りのNaH2PO4溶液200 mlとNa2HPO4溶液300 mlを少しづつ加えながらpH 7.0に合わせる．

　

Ⅱ．酢酸緩衝液（Acetate buffer）

pH 5の0.5 M酢酸緩衝液（acetate buffer） 300 mlを調製する場合．

　　表より0.5 M酢酸（acetic acid, CH3COOH, M.W 60.05,濃度99% ,比重(Sp, Gr)1.05）と0.5 M酢酸ナトリウム溶液（Sodium Acetate, CH3COONa, M.W 82.04）で調製する．表から，酢酸溶液１ｍｌと酢酸ナトリウム溶液２ｍｌで pH 5.0になる．したがって，0.5M酢酸溶液100 mlと0.5 M酢酸ナトリウム溶液200 mlを混合すればよいことになる．

　　　　CH3COOH-CH3COONa　                 

1/10M CH3COOH(ml) ４ ２ １ １
 1/10M CH3COONa(ml) １ １ ２ ８
pH ４．１ ４．４ ５．０ ５．６

1.各溶液の調製

酢酸溶液は，17.3 M (1000×0.99×1.05/60.05)である．したがって，17.3 M を0.5 Mに希釈して100 ml作ればよい．

   100 ml× 0.5 ／ 17.3  = 2.89 ml                              

 酢酸原液2.89 mlを取り，蒸留水で100 mlにする．

0.5 M酢酸ナトリウム

82.04×0.5×200／1000  = 8.204 g                                       

酢酸ナトリウム8.204 gを蒸留水に溶かし200 mlにする．

 

2.ｐＨの調整

0.5 M酢酸溶液 約80 mlに0.5 M酢酸ナトリウム溶液 約160 ml混合した後，ｐＨを見ながら残りの0.5 M酢酸溶液20 mlと0.5 M酢酸ナトリウム溶液40 ml を交互に加えてpH 5に調整する．

 

Ⅲ．ブリットンロビンソン広域緩衝液（Britton Robinson buffer）

Ⅳ．ミラーゴールダー等イオン強度緩衝液 (Millor Golder buffer)

Ｖ．0.3 M Sodium Chloride (NaCl,M.W 58.44) を含む0.03 M Phosphate buffer(pH 7.0) を１リットル調製する場合．

0.3 M Phosphate buffer (pH 7.0) 100 mlに，NaCl (58.44×0.5×1000/1000)17.53 gを蒸留水200～300 mlに溶かしたものを加え1000 mlにすればよい．